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酶活性分析法檢定蛋白質

更新時間:2013-01-16點擊次數:1226

方法步驟:
1) 吸取20 μL 的蛋白質樣本,小心注入微量滴定盤中,避免氣泡產生。
2) 每一樣品槽加入200 μL 基質液,混合均勻;可用燒熱的接種環去除氣泡。
3) 靜置約1~2 min,顏色開始加深,然后加入30 μL 終止液。 反應時間的長短,要以樣本中的酶活性大小來做調整。因為我們只測定色析法各分劃的相對酶活性,因此并不加終止液。
4) 以ELISA 光度計測定波長415 nm 的吸光值。

酶活性單位的測定:
a. 以上步驟,只可測定GUS 活性的相對大小,對色析法所得到的各個分劃進行偵測,相當方便,但并非酶活性單位的測定方法。
b. 若要測定酶的活性單位,要使用zui適當的酶用量,使酶在反應一段固定的時間后,其生成物的呈色吸光度,落在光度計的可測范圍的內;然后計算此段時間內,每分鐘所產生的吸光度增加量,轉換成生成物的莫耳數,即可求得其真正的活性單位。
c. 因此酶的活性單位定義為:每分鐘所能催化生成物的 μmole 數。

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